Guide d'échantillonnage de l'air pour les organismes cultivables (champignons ou bactéries)
Impacteurs de particules (échantillonneurs de type Andersen)
Cette méthode d'échantillonnage de l'air consiste à aspirer un volume d'air mesuré sur un milieu de culture contenu dans des boîtes de Petri. Ces boîtes sont ensuite incubées en laboratoire afin de permettre la croissance des micro-organismes déposés sur le milieu. Les champignons ou bactéries sont alors dénombrés et identifiés. Cette méthode utilise généralement un impacteur de type Andersen N-6 (par exemple, l'échantillonneur microbien EMSL VP-400, référence 8709001). Différentes géloses sont disponibles auprès d'EMSL Analytical, Inc., selon les types de champignons ou de bactéries à identifier.
Avantages
- Les cultures fongiques permettent de déterminer si le champignon est viable (vivant) et d'identifier le genre et l'espèce.
- Les cultures bactériennes permettent le dénombrement et l'identification des bactéries cultivables présentes dans l'air.
Inconvénients
- Il faut compter 6 à 10 jours pour que les micro-organismes se développent et soient identifiés.
- Étant donné que la plupart des échantillons environnementaux contiennent un grand nombre d'organismes, chacun doit rivaliser avec les autres pour se développer sur le milieu de culture. Par conséquent, les champignons et les bactéries présents dans l'air peuvent être sous-représentés en culture.
- Certains microbes ne se développent pas bien, voire pas du tout, sur les milieux de culture.
- Certains micro-organismes sont impossibles à identifier, car ils ne présentent pas de caractéristiques essentielles telles que des spores ou parce qu'ils ne sont pas décrits dans la littérature scientifique.
Recommandations générales concernant les médias : Champignons et bactéries
- Pour l’échantillonnage fongique, nous recommandons généralement la gélose à l’extrait de malt (MEA).
- Si vous effectuez des prélèvements dans des zones arides, l'utilisation du milieu DG18 favorisera la sélection de champignons hygrophiles qui ne se développent pas nécessairement sur gélose MEA.
- L'échantillonnage de Stachybotrys sp. peut être réalisé avec de la gélose cellulosique (CA) ou de la gélose à la farine de maïs (CMA).
- Pour les prélèvements bactériens, nous recommandons généralement la gélose trypticase soja (TSA) ou la TSA additionnée de sang 5%. • Pour les prélèvements de bactéries Gram négatif, nous recommandons la gélose MacConkey (MAC).
- Pour toutes les autres situations, le département de microbiologie se fera un plaisir de vous faire des recommandations en fonction de votre situation d'échantillonnage particulière.
- Les fournitures d'échantillonnage peuvent être commandées sur www.emsl.com ou en appelant le service client : 800-220-3675.
Comment manipuler les milieux microbiologiques (plaques de gélose)
- Les plaques de gélose doivent être conservées au réfrigérateur ou sur des accumulateurs de froid jusqu'à leur utilisation.
- Il faut laisser les plaques se réchauffer à température ambiante avant de prélever un échantillon (environ 15 minutes).
- Ne retirez le couvercle de la plaque à aucun moment, sauf lors du prélèvement d'échantillons.
- Après le prélèvement de l'échantillon, scellez le couvercle sur la plaque avec du Parafilm ou du ruban adhésif.
- Les plaques doivent être renvoyées à EMSL avec des accumulateurs de froid par livraison prioritaire le lendemain. Recongelez et réutilisez l'accumulateur d'origine (ce type d'accumulateur est stable pendant 24 heures).
- Un emballage adéquat doit être fourni pour protéger les plaques.
- Les plaques ne doivent pas entrer en contact direct avec le sachet réfrigérant, car le milieu de culture pourrait geler, invalidant ainsi les tests.
- En cas de retard dans l'envoi des plaques de gélose à EMSL, celles-ci doivent être réfrigérées jusqu'à ce qu'elles soient prêtes pour une livraison express.
Recommandations
- Portez des gants en latex ou en nitrile lors du prélèvement d'échantillons.
- Utiliser l'alcool isopropylique 70% pour désinfecter le dispositif d'échantillonnage entre chaque échantillon.
- Placez le couvercle de la boîte de Petri dans un sac propre pendant le prélèvement afin de réduire tout risque de contamination croisée.
- Inclure des échantillons externes et un échantillon témoin de terrain.
Procédure d'échantillonnage
- Laisser les plaques de gélose atteindre la température ambiante avant utilisation.
- Fixez une extrémité du tube à l'entrée de la pompe à vide et l'autre extrémité à l'entrée de l'échantillonneur.
- Calibrer le débit de la pompe à vide :
- Placer une boîte de Petri non couverte dans l'échantillonneur (ne pas soumettre cette boîte comme échantillon, la jeter après l'étalonnage).
- Mettez la pompe en marche et ajustez le débit jusqu'à ce que le rotamètre indique 28,3 LPM (le débit est lu au milieu du palier du rotamètre).
- Retirez le bouchon et le rotamètre avant l'échantillonnage.
- Essuyez toutes les surfaces exposées de l'échantillonneur avec une lingette imbibée d'alcool isopropylique 70% et laissez sécher à l'air libre.
- Placez la plaque de gélose sur la base de l'échantillonneur de manière à ce que la boîte de Petri repose sur les trois broches métalliques surélevées.
- Retirez le couvercle de la boîte de Petri et placez-la dans un sachet d'échantillon propre afin de minimiser la contamination (disponible sur demande).
- Assemblez l'étage de classification du jet sur l'échantillonneur et fixez le cône d'entrée avec les trois clips fournis.
- Réglez la minuterie sur une durée appropriée en fonction des conditions environnementales (la durée d'échantillonnage est généralement comprise entre 2 et 5 minutes).
- Mettez la pompe en marche et démarrez le minuteur simultanément.
- Une fois le temps écoulé, éteignez la pompe, démontez l'échantillonneur et replacez le couvercle sur la plaque de gélose.
- Fixez le couvercle sur la boîte de Petri avec du ruban adhésif de masquage ou du Parafilm (évitez d'utiliser du ruban adhésif électrique, d'emballage, transparent ou toilé).
- Inscrivez le numéro de l'échantillon au fond de la boîte de Petri.
- Consignez toutes les informations pertinentes relatives à la chaîne de traçabilité.
- Renvoyer les échantillons avec une poche de glace à EMSL Analytical pour analyse.
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