Guia de Amostragem de Ar Cultivável (Fungos ou Bactérias)
Impactadores de partículas (amostradores do tipo Andersen)
Este método de amostragem de ar envolve a aspiração de um volume medido de ar sobre meios de cultura em placas de Petri. As placas de Petri são incubadas em laboratório para que os microrganismos impactados na placa possam crescer. Os fungos ou bactérias são contados e identificados. Este método geralmente utiliza um impactor do tipo Andersen N-6 (por exemplo, o Amostrador Microbiano EMSL VP-400, ID do produto 8709001). Diferentes placas de ágar estão disponíveis na EMSL Analytical, Inc., dependendo dos tipos de fungos ou bactérias a serem identificados.
Benefícios
- Culturas de fungos podem determinar se o fungo é viável (vivo) e permitem a identificação do gênero e da espécie.
- As culturas bacterianas permitem a enumeração e a identificação de bactérias cultiváveis presentes no ar.
Desvantagens
- As culturas levam de 6 a 10 dias para crescer e identificar os microrganismos.
- Como a maioria das amostras ambientais contém um grande número de organismos, cada um precisa competir com os outros para crescer no meio de cultura. Consequentemente, fungos e bactérias presentes no ar podem não estar tão bem representados na cultura.
- Alguns microrganismos não crescem bem ou não crescem de todo nos meios de cultura.
- Alguns microrganismos não podem ser identificados, pois não produzem características essenciais, como esporos, ou podem não estar descritos na literatura científica.
Recomendações gerais para meios de cultura de fungos e bactérias
- Para amostragem de fungos, em geral, recomendamos o ágar extrato de malte (MEA).
- Se você estiver coletando amostras em áreas secas, o uso do meio DG18 ajudará a selecionar o crescimento de fungos que preferem ambientes secos e que podem não crescer em ágar MEA.
- A amostragem para Stachybotrys sp. pode ser realizada com ágar de celulose (CA) ou ágar de farinha de milho (CMA).
- Para amostragem bacteriana, em geral recomendamos Ágar Triptona de Soja (TSA) ou TSA com sangue 5%. • Para amostragem de bactérias Gram-negativas, recomendamos Ágar MacConkey (MAC).
- Para todas as outras situações, o Departamento de Microbiologia terá prazer em fazer recomendações com base na sua situação específica de amostragem.
- Os materiais para amostragem podem ser encomendados em www.emsl.com ou ligando para o Serviço de Atendimento ao Cliente: 800-220-3675.
Como manusear meios de cultura microbiológicos (placas de ágar)
- As placas de ágar devem ser mantidas refrigeradas ou em embalagens com gelo até o momento do uso.
- As placas devem ser deixadas aquecer até à temperatura ambiente antes de se retirar uma amostra (aproximadamente 15 minutos).
- Não remova a tampa da placa em nenhum momento, exceto durante a amostragem.
- Após a coleta da amostra, vede a tampa da placa com Parafilm ou fita adesiva.
- As placas devem ser enviadas de volta para o EMSL com gelo seco por entrega expressa com prioridade. Congele novamente e reutilize o gelo seco original (este tipo de gelo seco mantém a estabilidade por 24 horas).
- É necessário enviar material de embalagem adequado para proteger as placas.
- As placas não devem entrar em contato direto com a bolsa de gelo, pois o meio de cultura pode congelar, invalidando os testes.
- Caso haja algum atraso no envio das placas de ágar para a EMSL, elas devem ser refrigeradas até estarem prontas para entrega durante a noite.
Recomendações
- Use luvas de látex ou nitrilo durante a coleta de amostras.
- Utilize álcool isopropílico 70% para desinfetar o dispositivo de amostragem entre cada amostra.
- Coloque a tampa da placa de Petri em um saco limpo durante a coleta de amostras para reduzir qualquer contaminação cruzada.
- Inclua amostras externas e uma amostra em branco para controle.
Procedimento de amostragem
- Deixe as placas de ágar atingirem a temperatura ambiente antes de usar.
- Conecte uma extremidade do tubo à entrada da bomba de vácuo e a outra extremidade à entrada do amostrador.
- Calibre a vazão da bomba de vácuo:
- Coloque uma placa de Petri sem tampa no amostrador (Não envie esta placa como amostra, descarte-a após a calibração).
- Ligue a bomba e ajuste o fluxo até que o rotâmetro indique 28,3 LPM (a vazão é lida no centro do rolamento do rotâmetro).
- Remova a rolha e o rotâmetro antes de coletar a amostra.
- Limpe todas as superfícies expostas do amostrador com um algodão embebido em álcool isopropílico 70% e deixe secar ao ar.
- Coloque a placa de ágar na base do amostrador de forma que a placa de Petri fique apoiada nos três pinos de metal salientes.
- Remova a tampa da placa de Petri e coloque-a em um saco de amostra limpo para minimizar a contaminação (disponível mediante solicitação).
- Monte o estágio de classificação de jatos no amostrador e fixe o cone de entrada com os três clipes incluídos.
- Ajuste o temporizador para o tempo apropriado, dependendo das condições ambientais (o tempo de amostragem geralmente varia entre 2 e 5 minutos).
- Ligue a bomba e inicie o temporizador simultaneamente.
- Quando o tempo acabar, desligue a bomba, desmonte o amostrador e recoloque a tampa na placa de ágar.
- Prenda a tampa na placa de Petri com fita adesiva ou Parafilm (evite usar fita isolante, fita de embalagem, fita transparente ou fita adesiva para proteção).
- Escreva o número da amostra no fundo da placa de Petri.
- Registre todas as informações relevantes na Cadeia de Custódia.
- Devolva as amostras com gelo seco à EMSL Analytical para análise.
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