VIA-PACT 400 Manuel d'instructions
Manuel d'utilisation de l'échantillonneur de particules microbiennes viables
Introduction
La qualité microbienne de l'air est une source de préoccupation croissante. Un rapport de l'EPA a révélé que les problèmes de qualité de l'air intérieur coûtent aux entreprises 1,46 milliard de dollars par an. Étant donné que la plupart des gens passent la majeure partie de leur temps à l'intérieur (environ 90 millions de dollars), ce phénomène est extrêmement préoccupant.
Les risques microbiologiques liés à la qualité de l'air intérieur ont été mis en évidence dans de nombreux cas médiatisés. L'un des premiers cas marquants fut l'épidémie mortelle de légionellose survenue en 1976 lors d'un congrès de l'American Legion. La prise de conscience croissante, les préoccupations sanitaires et les risques juridiques ont fait de la qualité de l'air intérieur l'un des principaux enjeux environnementaux.
Les aérosols biologiques sont définis comme des particules solides ou liquides viables en suspension dans l'air. Leur taille peut varier de 0,1 micron de diamètre pour les virus à 100 microns, voire plus, de diamètre pour les spores fongiques. Ces organismes peuvent se présenter sous forme d'organismes isolés ou d'agrégats.
Deux contraintes empêchent l'utilisation des échantillonneurs de bioaérosols pour obtenir des résultats exploitables. Premièrement, l'organisme doit être isolé de l'air pour que l'analyse soit possible ; deuxièmement, il doit être viable et capable de se reproduire pour fournir des résultats utiles.
Échantillonneur de particules viables à un seul étage
Le Via-Pact 400 est un appareil en aluminium maintenu par trois brides à ressort et étanche grâce à deux joints toriques. Il se compose de trois étages principaux : un cône d’entrée, un étage de classification du jet et une plaque de base.
Le cône d'entrée constitue la partie supérieure de l'impacteur. L'air traverse d'abord cette partie lorsqu'il pénètre dans l'impacteur. L'étage de classification par jet comporte 400 trous percés avec précision. Lorsque l'air est aspiré à travers l'échantillonneur, il passe par ces trous, dirigeant les particules en suspension vers la surface de collecte de la gélose. La base de l'impacteur est munie d'un raccord cannelé pour le branchement à la pompe. Trois supports, fixés à la base, permettent de fixer une boîte de Petri de taille standard.
Matériel d'échantillonnage recommandé :
- VP-400
- Pompe à vide à haut débit capable d'aspirer
- 28,3 l/min
- Rotamètre
- Tubes en PVC souple
- Support d'échantillonnage (boîte de Petri de taille standard 15 x 100 mm)
- Sacs en plastique refermables (sacs à fermeture éclair)
- Alcool isopropylique (70%)
- Gel hydroalcoolique ou gants jetables à usage unique
- Gaze ou essuie-tout
- marqueur ou stylo à encre permanente
Méthode d'échantillonnage
Réglage du débit d'air
- Raccordez le raccord cannelé du VP-400 à l'entrée de la pompe à l'aide du tube flexible, en veillant à ce que les raccords ne fuient pas.
- Une fois le VP-400 et la tubulure raccordés à la pompe, réglez le débit d'air de la pompe d'échantillonnage à 28,3 L/min à l'aide d'un débitmètre étalonné selon une norme primaire. Arrêtez la pompe.
- Ne placez pas de plaque d'agar dans l'échantillonneur pendant l'étalonnage du débitmètre, car la contre-pression du milieu d'échantillonnage n'est pas significative.
- Après avoir réglé le débit, essuyez toutes les surfaces du VP-400 avec de l'alcool isopropylique à l'aide d'une compresse de gaze stérile.
Échantillonnage
- Lavez-vous les mains avec un désinfectant pour les mains ou utilisez des gants jetables et désinfectez-les ou changez-les à chaque fois qu'une contamination croisée est possible.
- Décrochez les ressorts du couvercle du VP-400 et retirez le cône d'entrée et l'étage de classification du jet, exposant ainsi la base.
- Déposez une boîte de Petri contenant le milieu de culture approprié sur le support, en veillant à ce que sa base repose sur les trois supports prévus à cet effet. Retirez le couvercle de la boîte de Petri et placez-le, face stérile vers le bas, sur la surface propre.
- Remettez immédiatement en place l'étage de classification du jet et le cône d'entrée sur la base, en veillant à ce que les joints toriques assurent l'étanchéité à chaque raccord. Fixez l'appareil à l'aide des trois colliers à ressort et vérifiez visuellement l'étanchéité.
- Placez le VP-400 sur une surface plane à une hauteur de 90 à 120 cm, ou sur un support d'échantillonnage entièrement déployé. Mettez la pompe à vide en marche pendant la durée appropriée.
- Arrêtez la pompe et décrochez les trois pinces. Replacez rapidement le couvercle de la boîte de Petri et retirez-la. Examinez la surface de la gélose à la recherche de traces d'impaction. L'absence de ces traces peut indiquer une mauvaise étanchéité des joints toriques lors du prélèvement, nécessitant un nouveau prélèvement. (Toutefois, en climat humide, l'humidité ambiante excessive peut empêcher l'apparition de ces traces.)
- Placer la boîte de Petri contenant la gélose dans un sachet plastique refermable. Indiquer sur le sachet les informations d'identification de l'échantillon.
- Sécuriser les échantillons et assurer la chaîne de traçabilité dans un conteneur d'expédition réfrigéré et les livrer/expédier au laboratoire pour analyse.
- Avant de prélever un autre échantillon, reportez-vous à l'étape # 1.
Contrôle de qualité
La pompe à vide doit être étalonnée avec un étalon primaire avant utilisation et réétalonnée en cas de variations de température ou de pression. Une plaque vierge non exposée doit également être analysée à chaque prélèvement comme témoin négatif. Des échantillons extérieurs doivent être prélevés à des fins de comparaison avec les échantillons intérieurs. Un échantillon témoin intérieur doit être prélevé dans les zones non concernées par les anomalies. N’utilisez jamais de support de prélèvement périmé, fissuré ou contaminé.
Médias d'échantillonnage
Tout milieu de culture contenu dans une boîte de Petri de taille standard (15 x 100 mm) peut être utilisé avec cet échantillonneur. Les milieux suivants sont généralement utilisés pour la plupart des études sur les bioaérosols. Des milieux personnalisés peuvent être employés pour des applications spécifiques.
Bactéries : La gélose trypticase soja (TSA) et la gélose trypticase soja avec du sang de mouton 5%, ou gélose au sang (BAP), sont des milieux à large spectre couramment acceptés pour l'isolement des bactéries.
Champignons : La gélose au dextrose de pomme de terre (PDA), la gélose à l'extrait de malt (MEA) et la gélose au dichloran glycérol 18 (DG-18) sont des milieux à large spectre couramment acceptés pour l'isolement des champignons.
Exemple de soumission
Il est essentiel de garantir l'intégrité des échantillons, de leur prélèvement initial à la communication des résultats. Cela implique de pouvoir retracer leur parcours depuis le lieu de prélèvement jusqu'à leur réception au laboratoire. Tout échantillon soumis à un laboratoire doit être accompagné d'un formulaire de chaîne de traçabilité dûment rempli. Ce formulaire comporte des champs pour le compte rendu, l'identification de l'échantillon, les analyses demandées et d'autres informations importantes.
Tous les échantillons doivent être correctement étiquetés avec une identification au fond de la boîte de Petri. Chaque échantillon doit être placé dans un sachet à fermeture hermétique ou un autre contenant approprié afin d'éviter toute contamination pendant le transport. Les échantillons doivent être conservés et expédiés dans un contenant isotherme, par exemple une glacière remplie de glace carbonique, pour préserver leur intégrité et doivent parvenir au laboratoire dans les 24 heures.
Analyses de laboratoire
Si des échantillons doivent être envoyés à un laboratoire commercial, il est fortement recommandé d'utiliser un laboratoire accrédité par A2LA ou par le programme EMLAP de l'American Industrial Hygiene Association (AIHA).
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